狂犬病病毒糖蛋白在大肠埃希菌中的表达及鉴定

• 作者: 乔明明 孙明 张向利 杨璐 王传彬 田克恭 赵铁柱 陈西钊
• 来源期刊: 中国实验动物学报
• 学科: 农学
• 关键词: 狂犬病病毒 糖蛋白 表达
• 年，卷（期）: 2009,（2）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 125-129,彩插三
• 页数: 6页
• 分类号: S855.3
• 字数: 3968字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-4847.2009.02.010

摘要

目的 表达狂犬病病毒糖蛋白(GP),用于狂犬病疫苗免疫抗体评估和狂犬病病毒糖蛋白功能的研究. 方法 采用分析软件,分析其可能的抗原表位,利用PCR方法 扩增狂犬病病毒SRV9疫苗株G蛋白抗原位点区域基因,PCR产物经EcoRI和SalI双酶切后,插入大肠埃希菌表达载体pGEX-6P-1,构建重组表达质粒pGEX-6P-1/G87a和pGEX-6P-1/G100a.将重组质粒转化大肠埃希菌BL21感受态细胞中,在IPTG诱导下表达目的 蛋白,进行SDS-PAGE分析.表达蛋白进行电洗脱纯化和Western blot鉴定分析.结果 成功构建了pGEX-6P-1/G87a和pGEX-6P-1/G100a表达质粒,序列分析表明,插入片段大小分别为1314 bp和1275 bp.SDS-PAGE分析结果 证明,在大肠埃希菌系统中成功表达了狂犬病病毒部分糖蛋白,表达的融合蛋白含有GST标签,大小分别约为74×103和73×103.Western blot鉴定结果 表明,表达产物有抗原特异性并能与狂犬病病毒抗血清反应.结论 利用大肠埃希菌表达系统成功表达了狂犬病病毒部分糖蛋白,表达产物有良好的反应原性.