双抗体夹心ELISA定量检测IFNβ-HSA融合蛋白方法的建立

• 作者: 张立操 张莲芬 张雁云 许正宏 许泓瑜 金坚 陈其亮 陈蕴 雷楗勇
• 来源期刊: 生物技术通报
• 学科: 生物学
• 关键词: 双抗体夹心 酶联免疫分析 β干扰素 人血清白蛋白 融合蛋白 定量分析
• 年，卷（期）: 2009,（1）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 121-125
• 页数: 5页
• 分类号: Q5
• 字数: 4347字
• 语种: 中文

摘要

为了建立β干扰素与人血清白蛋白融合蛋白(IFNβ-HSA)的酶联免疫定量分析方法,以抗IFNβ单克隆抗体为包被抗体,IFNβ-HSA融合蛋白为夹心抗原,辣根过氧化酶(HRP)标记抗HSA单克隆抗体为检测抗体,建立了一种定量测定IFNβ-HSA融合蛋白的双抗体夹心ELISA方法.并进行了检测限、精密度、准确度和稳定性等方法学考核.结果表明,包被抗体和检测抗体的最佳工作浓度均为2μg/ml,抗原浓度在51.88-3320 ng/ml范围内呈良好线性关系,相关系数R2>0.99.检测限为10ng/m1.经方法学考核,批内、批间变异系数分别为4.86%和8.08%,回收率为91.9%～110.4%,与IFN-B、IFN-α、HSA、IFNα2b-HSA基本无交叉反应.健全性分析表明发酵液稀释倍数对该方法无影响,8 d连续检测标准曲线表明稳定性良好.这种定量检测IFNβ-HSA融合蛋白的双抗体夹心ELISA方法,灵敏度高,重复性好,为当前融合蛋白发酵优化、分离纯化研究提供了定量检测的方法,并为后期药代动力学、临床研究提供了思路和备选方法.