CRT/MAGE-A3重组腺病毒载体的构建及体外表达的研究

• 作者: 刘新莉 陈洋 马萍
• 来源期刊: 中国医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 钙网织蛋白 黑素瘤抗原基因-A3 腺病毒 基因治疗
• 年，卷（期）: 2009,（7）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 493-496
• 页数: 4页
• 分类号: R73
• 字数: 3576字
• 语种: 中文

摘要

目的 构建钙网织蛋白/黑素瘤抗原基因-A3(CRT/MAGE-A3)双基因重组腺病毒载体,并进行体外表达研究.方法 从表达质粒pcDNA3/CRT中切取目的片段CRT,定向克隆至穿梭载体pShuttle-GFP-CMV.根据Genbank中提供的黑素瘤基因序列,设计并合成引物,以人肺癌组织cDNA文库为模板采用RT-PCR技术扩增人黑素瘤抗原基因-A3基因片段,测序后将黑素瘤抗原基因-A3基因片段定向克隆至穿梭载体,进而将穿梭载体克隆至Pac Ⅰ限制性内切酶线性化的腺病毒载体pAdxsi.结果 目的 片段CRT转入穿梭载体后,酶切鉴定pShuttle-(△GFP)-CRT正确.人肺癌组织经RT-PCR扩增出大小约950 bp的基因片段,测序证实为MAGE-A3 DNA后,克隆至穿梭载体pShutde-(△GFP)-CRT构建穿梭载体pShuttle-CRT-MAGE-A3,酶切鉴定证实构建正确.酶切穿梭载体将双基因片段克隆至腺病毒载体pAdxsi得到Ad-CRT/MAGE-A3病毒载体,酶切鉴定证实构建成功.转染293LP细胞并用Western blot检测到其体外表达.结论 成功构建CRT/MAGE-A3重组腺病毒载体并证实其能在体外有效表达CRT蛋白及MAGE-A3蛋白.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈洋	中国医科大学附属第一医院肿瘤研究所	33	84	5.0	6.0
2	刘新莉	中国医科大学附属第一医院肿瘤研究所	14	48	4.0	6.0
3	马萍	中国医科大学附属第一医院肿瘤研究所	40	212	9.0	12.0