基于荧光熔解曲线模式RT-PCR快速检测H_5N_1亚型禽流感病毒

• 作者: 岳华 张兆敏 张斌 李明义 汤承 马莉
• 来源期刊: 南京农业大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: 禽流感病毒 H5N1亚型 双重荧光RT-PCR 熔解曲线
• 年，卷（期）: 2009,（4）
• 页码范围: 116-121
• 页数: 6页
• 分类号: S85265
• 字数: 3531字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-2030.2009.04.022

摘要

针对H5N1亚型禽流感病毒(AIV)的HA、NA基因保守序列设计2对引物,建立了SYBR Green Ⅰ双重荧光RT-PCR(RRT-PCR)方法,实现了同一反应管内同时检测AIV的H5和N1亚型基因.熔解曲线分析显示,H_5和N_1扩增片段的熔解温度分别为(795±03)℃和(833±03)℃,无引物二聚体形成,扩增产物片段大小分别为150bp和474bp,与预期大小相符,测序结果证实为H_5和N_1亚型基因的靶序列.该方法能从H_5N_1样本中检出阳性扩增信号,熔解曲线可见H_5和N_1双特异峰;而H_5N_2样本有阳性扩增,熔解曲线仅见H_5单特异峰.AIV的其他HA亚型和其他病毒的RNA、DNA 无扩增信号.本法最低可检测210拷贝·μL~(-1)和195拷贝·μL~(-1) H_5和N_1重组质粒,敏感度分别是RT-PCR的100、1 000倍.本研究建立的基于荧光熔解曲线模式RT-PCR可用于H5N1亚型AIV的检测.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	岳华	西南民族大学生命科学与技术学院	187	1071	15.0	23.0
3	汤承	西南民族大学生命科学与技术学院	194	1150	15.0	24.0
5	马莉	中国医学科学院成都输血研究所	29	164	5.0	12.0
8	李明义		13	90	6.0	9.0
11	张兆敏	西南民族大学生命科学与技术学院	10	25	4.0	4.0