枯草杆菌重组水蛭素的分离纯化工艺研究

• 作者: 徐庆刚 耿旭 陈华友 齐向辉
• 来源期刊: 农业科学与技术（英文版）
• 学科: 工学
• 关键词: 水蛭素 枯草杆菌 离子交换 分离纯化
• 年，卷（期）: 2009,（6）
• 所属期刊栏目: 农业基础科学与方法
• 页码范围: 15-19
• 页数: 5页
• 分类号: TQ46
• 字数: 1368字
• 语种: 英文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-4229-B.2009.06.006

摘要

[目的]优化枯草杆菌重组水蛭素的分离纯化工艺.[方法]通过系列预处理和初步层析和精细纯化试验.发酵液固液分离和预处理:大批的发酵液采用连续流离心,取上清液,滴加50%三氯乙酸,当pH值达到2.2～2.5时停止滴加,静置1 h,离心,取上清液,用饱和NaOH调pH值回中性.然后利用SYNDER-UF202型超滤装置进行超滤浓缩脱盐,先用孔径为0.1 μm的滤膜芯进行微滤除大固粒,再用截留分子量为1 000 Da的超滤膜芯进行超滤浓缩,加蒸馏水重复超滤浓缩脱盐.然后在等电点pH 4.0左右进行6倍体积的乙醇沉淀浓缩.离子交换初步层析:最佳pH值8.0,以Tris-HCl缓冲体系为佳;强阴离子交换选用Q Sepharose F.F.介质;系统电导率6 mg/cm,水蛭素的最大上样量以每毫升介质240 ATU为佳,流速1 ml/min;优化工艺在强阴离子交换HiPrep 16/10Q上放大.Sephacryl S-100凝胶过滤柱纯化水蛭素:在一定流速范围内,流速对纯化效果影响不大,上样量可在10ml左右.[结果]优化的分离纯化路线为:大量发酵液→离心→三氯乙酸处理(91%回收率)→再离心→超滤浓缩脱盐(80%回收率)→乙醇沉淀浓缩(82%回收率)→强阴离子交换(90%回收率)→硫酸氨沉淀浓缩(90%回收率)→SepharcylS-100凝胶过滤(回收率93%)→纯品(总回收率=91%×80%×82%×90%×90%×93%=45%,纯度95.1%).[结论]可为进一步工业化分离纯化水蛭素研究提供借鉴.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	徐庆刚		18	79	6.0	8.0
2	齐向辉		20	81	6.0	8.0
4	陈华友		17	78	6.0	8.0
10	耿旭	河南大学医学院	17	68	5.0	8.0