猪轮状病毒双抗体夹心ELISA检测方法的建立

• 作者: 余慧 徐璐 文心田 曹三杰 曾燕 黄小波
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 学科: 农学
• 关键词: 猪轮状病毒 双抗体夹心酶联免疫吸附试验 检测 建立
• 年，卷（期）: 2009,（8）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 723-727
• 页数: 5页
• 分类号: S852.659.4
• 字数: 5421字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-4696.2009.08.013

摘要

用差速离心法纯化的猪轮状病毒(RV)分别免疫仔猪和兔,制备了猪抗RV和兔抗RV超免疫血清,并用层析方法进行了纯化,建立了检测RV的双抗体夹心ELISA方法.结果表明,该双抗体夹心ELISA的最佳反应条件为:猪抗RV IgG包被浓度为4 μg/mL,兔抗RV IgG最佳工作浓度为3.5μg/mL,样品反应时间为90 min,酶标抗体工作浓度为1:8 000,以D<,450nm≥10.161作为阳性判定标准.该ELISA的重复性变异系数小于10 %,最低检测限为1.25μg/mL,并与猪瘟病毒、猪伪狂犬病病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒、猪大肠杆菌和沙门菌等病原无交叉反应,该ELISA试剂在室温和4℃条件下至少可保存4个月.用该ELISA方法和RV金标检测卡检测70份临床粪便样品,结果显示,ELISA的阳性检出率为22.9%,而金标检测卡的阳性检出率为20.0%.表明,建立的双抗体夹心ELISA方法具有特异性好、灵敏性高和重复性好等优点,可用于RV的快速检测.