幽门螺杆菌儿童分离株尿素酶基因B的克隆及序列分析

• 来源期刊: 中国当代儿科杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 幽门螺杆菌 尿素酶B基因 克隆 儿童
• 年，卷（期）: 2009,（11）
• 所属期刊栏目: 论著·临床研究
• 页码范围: 877-880
• 页数: 4页
• 分类号: R394-33
• 语种: 中文

摘要

目的 克隆幽门螺杆菌(Hp)临床儿童分离株尿素酶B(UreB)基因入pGEX-4T-1表达载体,并进行测序及基因比对分析,为以UreB作为Hp疫苗分子的13服疫苗研制奠定基础.方法 根据GenBank中HP UreB序列,设计一对特异性引物PCR扩增Hp临床儿童分离株UreB全长基因,EcoR Ⅰ及Not Ⅰ酶切后与做相应酶切的pGEX-4T-1连接,转化大肠杆菌BL21,提取质粒进行双酶切鉴定及基因测序,并对测序结果进行比对分析.结果 以Hp儿童分离株GZCH1为模板,成功扩增了UreB基因,基因大小为1710 bp,重组pGEX-4T-1-Ure双酶切鉴定可见目的 片段,测序结果显示UreB在正确阅读框中,序列比对分析显示其与相关报道序列核苷酸和氨基酸一致性达98%.Hp儿童分离株GZCH1 UreB序列已登录GenBank(登录号:FJ455126).结论 从Hp儿童分离株GZCH1中成功克隆了UreB基因,为UreB Hp口服疫苗研制奠定了基础.