不可分型流感嗜血杆菌Hap基因的克隆及原核表达

• 作者: 姚锋 李婉宜 李明远 杨远 蒋忠华 邝玉 陈长春
• 来源期刊: 生物医学工程学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 不可分型流感嗜血杆菌 Hap蛋白 原核表达
• 年，卷（期）: 2009,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1072-1076
• 页数: 5页
• 分类号: R378.41
• 语种: 中文

摘要

构建不可分型流感嗜血杆菌(Non-typeable Haemophilus influenzae,NTHi)Hap基因的原核表达载体,并诱导其表达Hap融合蛋白.以NTHi标准株ATCC49247基因组DNA为模板扩增出Hap目的基因片段,双酶切后连接于原核表达载体pET-32a(+),构建Hap重组原核表达质粒pET-32a(+)-Hap,将经PCR、酶切及DNA测序鉴定正确者转化E.coli BL21(DE3),诱导表达带有His标签的Hap融合蛋白.SDS-PAGE电泳分析重组蛋白的相对分子量大小及表达形式,Western blot进一步鉴定表达产物的特异性.通过PCR成功扩增出NTHi Hap基因,构建了具有正确基因序列的Hap原核表达质粒pET-32a(+)-Hap,SDS-PAGE电泳分析成功表达出相对分子量(Mr)为176 000的重组融合蛋白,该蛋白主要以包涵体的形式存在;Western blot结果表明该重组融合蛋白可与抗His-tag单克隆抗体发生特异性结合.NTHi Hap蛋白在原核表达系统中的成功表达,将为Hap蛋白免疫活性的深入研究及NTHi新型保护性疫苗的开发奠定实验基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李明远		80	362	11.0	14.0
2	李婉宜		43	207	7.0	12.0
3	蒋忠华		18	52	4.0	6.0
4	姚锋		4	5	1.0	2.0
5	杨远		20	90	5.0	8.0
6	邝玉		21	99	5.0	9.0
7	陈长春		6	25	2.0	5.0