Taq Man-MGB探针Taq Man-MGB探针实时荧光PCR检测金黄色葡萄球菌的研究

• 作者: 朱敏 梅玲玲 高筱萍 黎超仕
• 来源期刊: 中国卫生检验杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 金黄色葡萄球菌 Taq Man-MGB探针 实时荧光PCR 检测
• 年，卷（期）: 2009,（1）
• 所属期刊栏目: 微生物检测方法
• 页码范围: 120-123
• 页数: 4页
• 分类号: R378.1+1
• 语种: 中文

摘要

目的:建立Taq Man-MGB探针实时荧光PCR检测金黄色葡萄球菌的方法.方法:在对金黄色葡萄球菌的基因序列进行分析、对比基础上,设计一对特异性引物及探针;通过对Taq Man-MGB探针实时荧光PCR反应条件和反应体系的优化,实现对金黄色葡萄球菌的快速检测;用金黄色葡萄球菌标准株、金黄色葡萄球菌分离菌株及铜绿假单胞菌、黄色微球菌、乙型溶血性链球菌、柠檬酸杆菌、白念珠菌、粪链球菌、表面葡萄球菌、英诺克李斯特菌、李斯特菌等其它菌种验证方法的敏感性、特异性和稳定性.结果:本方法的特异性极强,检测标准金黄色葡萄球菌和41株金黄色葡萄球菌分离株的循环域值(CT值)在17.3～28.7之间,均为阳性,而铜绿假单胞菌、黄色微球菌、乙型溶血性链球菌、柠檬酸杆菌、白念珠菌、粪链球菌、表皮葡萄球菌、英诺克李斯特菌等52株非金黄色葡萄球菌菌株均为阴性,CT值均大于34或扩增曲线为一平滑直线;经6 h增菌后,金黄色葡萄球菌的最低检测限为5.8 cfu/ml;纯菌1个半小时就可以出结果;连续6次重复试验,变异系数<3%.结论:本研究建立的金黄色葡萄球菌Taq Man-MGB探针实时荧光PCR方法具有灵敏度高、特意性强、快速、操作方便等特点.