两种植原体的PCR检测及其体系优化

• 作者: 乾义柯 张祥林 王翀 马春春
• 来源期刊: 新疆农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 植原体 PCR 巢式PCR 体系优化
• 年，卷（期）: 2009,（3）
• 页码范围: 561-566
• 页数: 6页
• 分类号: S41
• 字数: 4547字
• 语种: 中文

摘要

用已报道的植原体通用引物对葡萄黄化病和枣疯病植原体进行常规PCR及巢式PCR检测,并对PCR反应体系进行优化.结果表明:常规PCR扩增出了1.5 kb的特异片段,所需PCR模板DNA用量为20 ng/μL;在PCR基础上的巢式 PCR扩增出1.2 kb的特异片段,所需PCR模板DNA用量为2 pg/μL.检测灵敏度提高约10 000倍.优化试验表明:25 μL反应体系中,MgCl2用量对扩增效果影响最大.最终最佳反应体系确立为:25 mM MgCl21.7 μL,2.5 mM dNTP 1.8 μL,5U/μL Taq酶可选用0.2 μL,10mM引物对各0.2 μL,最佳退火温度为45.0℃.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张祥林		65	571	13.0	21.0
2	王翀		28	109	6.0	9.0
3	马春春		4	32	3.0	4.0
5	乾义柯		3	12	2.0	3.0