基于荧光检测的糜子 Genic-SSR PCR 体系优化

• 作者: 侯思宇 张彬 曹鑫 李红英 李耀深 段明 王俊杰 韩渊怀
• 来源期刊: 山西农业大学学报(自然科学版)
• 关键词: 糜子 Genic-SSR 体系优化 正交试验设计
• 年，卷（期）: 2016,（7）
• 页码范围: 477-482
• 页数: 6页
• 分类号: S516
• 语种: 中文

摘要

[目的]本研究基于 Fragment Analyzer 全自动毛细管电泳荧光检测系统,以期建立一个最优的糜子 Genic-SSR 分子标记 PCR 反应体系。[方法]试验采用 L16(44)正交设计,设计了 Taq DNA 聚合酶、Mg2+、dNTPs 和引物的不同浓度组合,并用 Pragment Analyzer 全自动毛细管电泳荧光检测系统检测 PCR 产物。[结果]Taq DNA 聚合酶、Mg2+、dNTPs、引物浓度对 PCR 反应效应为：Mg2+>引物> dNTPs > Taq DNA 聚合酶。通过正交实验设计确立了糜子 Genic-SSR 荧光 PCR 检测体系的最佳反应组分：20μL 的反应体系中包含0.2 mmol·L-1的 dNTPs,0.2μmol· L-1引物,1.5 mmol·L-1的 Mg2+和0.5 U 的 Taq DNA 聚合酶。[结论]本研究建立了糜子的 Genic-SSR 分子标记的最佳荧光 PCR 反应体系,为糜子种质资源遗传多样性分析中分子标记开发、验证和辅助育种奠定了基础。