小反刍兽疫病毒N、H和F蛋白的真核表达

• 作者: 包静月 吴树清 李金明 王志亮 田晓灵 赵永刚
• 来源期刊: 中国动物检疫
• 学科: 农学
• 关键词: 小反刍兽疫病毒 真核表达 重组质粒 转染
• 年，卷（期）: 2009,（8）
• 所属期刊栏目: 试验研究
• 页码范围: 31-34
• 页数: 4页
• 分类号: S852.659.5|Q786
• 字数: 3328字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-944X.2009.08.017

摘要

目的构建小反刍兽疫病毒(PPRV)H、N、F、NF重组真核表达质粒并观察其在真核细胞内的表达情况.方法采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,从病羊组织中扩增PPRV的N、H、F基因序列并克隆到真核表达载体pIRES1neo中,最后用PCR、酶切和序列分析对重组质粒进行鉴定;将重组质粒以磷酸钙介导法转染Vero细胞,用免疫荧光方法鉴定其在细胞中的表达.结果将RT-PCR产物电泳,得到与预期大小相符的特异性片段;重组质粒经pIRES1-N、pIRES1-H、pIRES1-F和pIRES1 NF酶切后,均出现预期相符的片段;DNA测序表明插入片段的序列与小反刍兽疫病毒N、H、F蛋白基因序列完全一致,其大小分别为1575bp、1830bp和1641bp;将重组质粒感染真核细胞,经免疫荧光检测,证明所有蛋白均得到表达.结论成功构建了重组真核表达质粒pIRES1-N、pIRES1-H、pIRES1-F和pIRES1NF,为继续进行基因免疫研究奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王志亮	中国动物卫生与流行病学中心国家外来动物疫病诊断中心	134	936	18.0	25.0
2	包静月	中国动物卫生与流行病学中心国家外来动物疫病诊断中心	18	209	8.0	14.0
3	李金明	中国动物卫生与流行病学中心国家外来动物疫病诊断中心	18	127	6.0	11.0
4	赵永刚	中国动物卫生与流行病学中心国家外来动物疫病诊断中心	34	155	7.0	11.0
5	田晓灵	中国动物卫生与流行病学中心国家外来动物疫病诊断中心	3	6	2.0	2.0