小反刍兽疫病毒N基因的原核表达

• 作者: 夏咸柱 孙玮 张涛 杨松涛 杨玉姣 王承宇 王铁成 秦峻岭 阮洋 高玉伟 黄耕
• 来源期刊: 动物医学进展
• 学科: 生物学
• 关键词: 小反刍兽疫病毒N基因 原核表达 SDS-PAGE电泳 Western-blot
• 年，卷（期）: 2011,（3）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 21-25
• 分类号: Q386
• 字数: 3963字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-5038.2011.03.005

摘要

目的是表达出小反刍兽疫病毒的核蛋白,并鉴定其活性.根据GenBank发表的小反刍兽疫病毒(PPRV)Nigeria 75/1株N基因序列,对其进行基因优化并合成.设计引物,利用PCR的方法扩增PPRV-N基因,将该基因片段定向克隆到原核表达载体pET-28a(+)中,构建原核表达栽体pET-28a-N.阳性质粒转化原核表达宿主菌Transetta(DE3),用IPTG诱导表达并确定表达N基因的最佳诱导时间、温度.通过SDS-PAGE电泳和Western blot分析确定表达蛋白的表达量和活性.扩增出PPRV-N基因,构建的原核表达栽体pET-28a-N和原核表达菌,表达了N蛋白,表达蛋白能与PPRV阳性血清发生特异性反应.