小反刍兽疫病毒原核表达体外转录系统的建立

• 作者: 杨仕标 赵文华 高华峰 高林
• 来源期刊: 动物医学进展
• 学科: 农学
• 关键词: 小反刍兽疫病毒 微型复制子 氯霉素乙酰转移酶
• 年，卷（期）: 2016,（10）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 21-25
• 页数: 5页
• 分类号: S852.659.5
• 字数: 3758字
• 语种: 中文

摘要

构建了小反刍兽疫病毒（PPRV）辅助质粒和微型复制子（minireplicon）并进行功能学研究。RT-PCR 克隆 PPRV 疫苗株 N75／1 N、P 和 L 基因，亚克隆至有 T7启动子的原核表达载体 pGEM3Z 构建完成3个辅助质粒，分别命名为 pGEM3Z-N、pGEM3Z-P 和 pGEM3Z-L，并通过全基因合成构建含 PPRV病毒5′端启动子序列（AGP）、3′端启动子序列（GP）、T7转录终止信号、丁型肝炎病毒核酶序列 HamRZ 及氯霉素乙酰转移酶（CAT），获得 PPRV 微型复制子重组质粒 pGEM3Z-CAT。构建完成的微型复制子及辅助质粒在表达 T7 RNA 多聚酶（T7 RNP）感染痘病毒 VTF7-3后，通过脂质体法优化4种质粒配比，并将其转染至 Vero 细胞，通过间接免疫荧光分析 CAT 的表达情况，荧光显微镜观察到荧光的表达，并通过免疫印迹分析 CAT 蛋白的表达，表明构建的 PPRV 微型复制子具有转录和复制功能，这将有助于进一步开展以PPRV 反向遗传操作为基础的免疫学及蛋白功能研究。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	高华峰		14	73	6.0	8.0
2	赵文华		12	99	4.0	9.0
3	高林		2	7	1.0	2.0
4	杨仕标		8	23	3.0	4.0