小反刍兽疫病毒Nigeria75/1株F基因的克隆与原核表达

• 作者: 岳城 才学鹏 朱学亮 杨帆 窦永喜 骆学农
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 学科: 农学
• 关键词: 小反刍兽疫病毒 F蛋白 克隆 原核表达
• 年，卷（期）: 2009,（6）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 503-509
• 页数: 7页
• 分类号: S852.659.5|Q786
• 字数: 6519字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-4696.2009.06.007

摘要

提取小反刍兽疫病毒(PPRV)疫苗株Nigeria 75/1的总RNA,用RT-PCR方法扩增F基因并克隆到pMD18-T载体中,以鉴定正确的质粒为模板克隆去掉N端信号肽和跨膜区的F基因(F-1)并亚克隆于原核表达载体pET-30a(+),得到重组质粒pET30-F-1,转化大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导表达,表达产物进行SDS-PAGE、Western-blot分析,同时将重组蛋白免疫SPF家兔制备抗体,进行间接免疫荧光检测并用ELISA测定抗体效价.结果显示,目的基因正确插入了表达载体,在大肠杆菌中主要以包涵体形式表达,用重组蛋白免疫3次后,兔血清抗体达到较高水平,Western-blot分析说明表达产物能够与兔血清抗体发生特异性反应,间接免疫荧光试验显示重组蛋白免疫兔阳性血清能够识别PPRV Nigeria 75/1株全病毒抗原.表明,重组蛋白在原核表达系统内得到了高水平的表达,并且具有较好的反应原性.