小反刍兽疫病毒甘肃株F基因的克隆、原核表达及多克隆抗体的制备

• 作者: 包世俊 常惠芸 肖敏 薛慧文 邢小勇
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 小反刍兽疫病毒(PPRV) F基因 克隆 原核表达 免疫原性
• 年，卷（期）: 2017,（3）
• 所属期刊栏目: 研究论文与报告
• 页码范围: 477-484
• 页数: 8页
• 分类号: S855.3
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2017.03.015

摘要

小反刍兽疫(peste des petits ruminants,PPR)是由副黏病毒科(Paramyxoviridae)麻疹病毒属(Morbillivirus)的小反刍兽疫病毒(Peste des petits ruminants virus,PPRV)引起绵羊(Ovis aries)和山羊(Capra hircus)等小反刍兽的一种急性和高度传染性病毒性疾病,由于其高死亡率常造成绵羊和山羊养殖业的重大经济损失.为研究小反刍兽疫病毒甘肃(GS)株融合蛋白(fusion protein)基因序列特征及其免疫原性,参照GenBank中PPRV Nigeria 75/1株F基因序列(GenBank登录号:HQ197753)设计引物,应用RT-PCR扩增PPRV GS株F基因,在测序及序列分析的基础上,设计引物扩增去信号肽和跨膜区的F基因片段Fa并将其亚克隆至原核表达载体pET-32a(+).重组质粒pET-PPRV-Fa转化大肠杆菌表达菌(Escherichia coli)Transetta(DE3)后经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导表达,表达产物纯化后免疫新西兰兔(Oryctolagus cuniculus)制备多克隆抗体,进而应用间接酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)和Western blot对重组蛋白免疫原性进行分析.结果表明,PPRV GS株F基因(GenBank登录号:KX822738)完整CDS全长1 641 bp,编码546个氨基酸.去信号肽和跨膜区的F基因片段Fa在大肠杆菌中成功获得表达,重组蛋白大小约为59 kD,且主要以包涵体形式存在;间接ELISA和Western blot结果表明,纯化产物免疫原性良好.研究结果为F蛋白的相关功能研究及小反刍兽疫的快速诊断方法的建立提供了理论依据.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	常惠芸	中国农业科学院兰州兽医研究所	49	411	12.0	18.0
2	薛慧文	甘肃农业大学动物医学院	45	105	5.0	7.0
3	邢小勇	甘肃农业大学动物医学院	42	49	4.0	4.0
4	包世俊	甘肃农业大学动物医学院	43	52	4.0	5.0
5	肖敏	甘肃农业大学动物医学院	5	15	2.0	3.0