小反刍兽疫病毒M基因截短表达及鉴定

• 作者: 李刚 王勇 程朝飞 金红岩 陶春爱 隋修锟 黄华欣
• 来源期刊: 中国动物检疫
• 学科: 农学
• 关键词: 小反刍兽疫病毒 M基因 截短 表达
• 年，卷（期）: 2012,（10）
• 页码范围: 40-45
• 分类号: S852.659.5
• 字数: 6030字
• 语种: 中文

摘要

目的将小反刍兽疫病毒M蛋白基因截短表达后用于特异性单抗制备及临床抗体水平检测.方法:用在线分析软件BepiPred分析小反刍兽疫病毒M蛋白潜在的B细胞线性表位,以本实验室构建的pCR?2.1T-PPRV M质粒为模板,扩增三段截短的M基因,纯化后的PCR产物分别与克隆载体pCR?2.1T连接,筛选出的阳性重组质粒经双酶切后,分别与表达载体pET-32a(+)及pGEX-6p-1连接,再将鉴定为阳性的重组质粒转化入E.coli BL21(DE3)菌株诱导表达,并用SDS-PAGE及Western blot验证.结果PCR产物电泳,得到与预期大小相符的特异性片段.对连接克隆载体及表达载体的重组质粒双酶切后,均出现与预期一致的片段, DNA测序表明,插入片段序列与小反刍兽疫Nigeria75/1株M蛋白基因完全一致.重组蛋白经SDS-PAGE及Western blot鉴定,证明所构建的重组蛋白均获得高效表达,并均具有良好的反应原性.结论成功表达了小反刍兽疫截短M基因的蛋白,为制备特异性单抗及小反刍兽疫抗体检测奠定了一定基础.