呼吸道合胞病毒M2:81-95与热休克蛋白70L1融合蛋白的制备及其免疫原性

• 作者: 亓晓温 张振亚 曾瑞红 梅兴国 魏林
• 来源期刊: 中华传染病杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 呼吸道合胞病毒 T淋巴细胞,细胞毒性 表化,T淋巴细胞 热休克蛋白质类 重组融合蛋白质类 T淋巴细胞亚群
• 年，卷（期）: 2009,（1）
• 所属期刊栏目: 基础论著
• 页码范围: 11-15
• 页数: 5页
• 分类号: R3
• 字数: 3771字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1000-6680.2009.01.004

摘要

目的 构建呼吸道合胞病毒(RSV)CTL表位M2:81-95与热休克蛋白(HSP)70L1融合蛋白的重组质粒,原核表达后初步研究其免疫原性.方法 从SMMC7721细胞中克隆HSP70L1基因.PCR扩增M2:81-95基因片段,鉴定后构建质粒pET-HSP70L1-M2:81-95(pET-HSP70L1-M2).经PCR和酶切鉴定,转化E.coli BL21(DE3).用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达HSP70L1-M2:81-95(HSP70L1-M2),Ni-螫合亲合层析纯化,梯度透析复性.用该蛋白免疫10只BAlB/c小鼠,ELISA榆测IgG抗体及其亚型.噻唑蓝(MTT)法榆测CTL杀伤活性.结果 成功构建重组质粒pET-HSP70L1-M2,并在E.coli中表达重组蛋白HSP70L1-M2,该蛋白诱导RSV及表位特异性的CTL活性,还诱导蛋白抗原特异性的IgG,为4.87±0.35、IgGl为5.53±0.28、IgG2a为4.40±0.21.且IgG1/IgG2a(1.26)的比例平衡,与PBS对照组的IgG,为0.33±0.17、IgG1为0.51±0.21、IgG2a为0比较,差异有统计学意义(t=3.512,3.681,5.856;P<0.05).结论 成功构建原核表达质粒pET-HSP70L1-M2,斤表达纯化获得重组蛋白,免疫小鼠后诱导RSV及表位特异性的CTL活性和辅助性T淋巴细胞(Th)1/Th2混合型应答.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	梅兴国	军事医学科学院毒物药物研究所	199	1671	19.0	29.0
2	曾瑞红	河北医科大学免疫教研室	25	182	7.0	13.0
3	魏林	河北医科大学免疫教研室	46	214	8.0	12.0
4	张振亚	军事医学科学院毒物药物研究所	6	63	2.0	6.0
5	亓晓温	军事医学科学院毒物药物研究所	2	15	1.0	2.0