小鼠IL-4重组质粒的构建及目的蛋白的表达和纯化

• 作者: 任潇潇 周西坤 李倩 李炯 罗晓蕾 邱吉 黄浓郁
• 来源期刊: 四川大学学报（医学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 重组小鼠白细胞介素-4 蛋白纯化 生物学活性
• 年，卷（期）: 2009,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 579-583
• 页数: 5页
• 分类号: Q786
• 字数: 4239字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-173X.2009.04.003

摘要

目的 构建重组小鼠白细胞介素-4(rmIL-4)原核表达载体,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,纯化目的蛋白并鉴定.方法 将优化后的小鼠IL-4 cDNA片段克隆到原核表达载体pET-32a (+)上,获得重组质粒pET32/rmIL-4,转入BL21(DE3)中经IPTG诱导表达得到包涵体.经复性处理后,依次用阴离子交换柱和分子筛纯化蛋白.对纯化得到的蛋白用Western blot检验免疫学特异性,用mIL-4生长依赖性细胞株CTLL-2增殖实验和动物实验测定其生物学活性.结果 经酶切和测序证实重组质粒pET32/rmIL-4构建成功.诱导得到的包涵体用3 mol/L盐酸胍溶液洗涤后溶于加有β-巯基乙醇的7 mol/L盐酸胍溶液中变性,在pH9.5的条件下梯度透析复性.纯化出的蛋白经Western blot鉴定,能与抗小鼠IL-4抗体特异性结合;经细胞和动物实验鉴定,rmIL-4蛋白具有生物学活性,能刺激mIL-4生长依赖性细胞株CTLL-2增殖,使小鼠体内细胞因子发生从TH1到TH2的漂移.结论 成功制备了高纯度、具有生物学活性的小鼠IL-4,为进一步研究其生物学功能提供了条件.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	罗晓蕾	四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室	2	2	1.0	1.0
2	任潇潇	四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室	1	2	1.0	1.0
3	黄浓郁	四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室	3	2	1.0	1.0
4	邱吉	四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室	6	16	2.0	4.0
5	李倩	四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室	77	271	8.0	15.0
6	周西坤	四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室	4	5	2.0	2.0
7	李炯	四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室	14	27	3.0	5.0