抗肿瘤双特异免疫导向治疗制剂CAtin的表达及活性分析

• 作者: 刘妍 刘立明 李昌 李霄 田明尧 贾鹏 金宁一 陈漉 高鹏
• 来源期刊: 高等学校化学学报
• 学科: 化学
• 关键词: 癌胚抗原 二硫键稳定性单链抗体 凋亡素基因 原核表达
• 年，卷（期）: 2009,（4）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 682-686
• 页数: 5页
• 分类号: O629.73|Q511|R730.54
• 字数: 3500字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0251-0790.2009.04.008

摘要

结合生物信息学方法与已知癌胚抗原(Carcinoembryonic antigen, CEA)特异性单链抗体(Single chain Fv fragment, scFv)核苷酸序列, 经分子设计和密码子优化后, 通过化学方法合成CEA二硫键稳定性单链抗体(Disulfide stabilized single chain Fv fragments, scdsFv)基因片段. 将凋亡素基因(Apoptin)通过一段柔性连接肽(Linker)连接在CEA scdsFv基因下游, 并克隆入大肠杆菌表达载体质粒pET28a, 转化BL21感受态菌后经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(Isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside, IPTG)诱导, 表达融合蛋白CAtin.SDS-PAGE和Western-Blot分析表明, 目的蛋白得到良好表达, 经条件优化后表达量最高可达44.1 mg/L. 融合蛋白经分步洗涤法和谷胱甘肽对表达的目的蛋白进行初步纯化和复性后, 利用人肝癌细胞(HCC)对所制备融合蛋白进行亲和力测定、细胞结合活性测定和特异性细胞杀伤活性分析.结果显示, 所制备融合蛋白不仅能够有效地与上述肿瘤细胞结合, 并对其具有明显的杀伤活性, 表明成功制备了具有特异性识别和特异性杀伤活性的双特异抗肿瘤免疫导向制剂.