bcr/abl特异性siRNA真核表达载体的构建及鉴定

• 作者: 周永安 张景萍 郭向荣
• 来源期刊: 临床医药实践
• 学科: 医学
• 关键词: 慢性髓细胞性白血病 bcr/abl融合基因 真核表达载体 RNA干扰
• 年，卷（期）: 2009,（9）
• 所属期刊栏目: 临床医学
• 页码范围: 650-652
• 页数: 3页
• 分类号: R733.72
• 字数: 2410字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-8631.2009.09.005

摘要

目的:构建ber/abl的特异性siRNA真核细胞表达载体,并初步探索对K562细胞bcr/abl mRNA和P210蛋白的影响.方法:根据GenBank数据库提供的bcr/abl基因核苷酸序列,按照Tusch Ⅰ设计原则,选择设计双链小干扰RNA(siRNA),再转化为能表达其小发卡结构RNA(shRNA)的DNA序列,并与pTER质粒定向连接,构建受控于人RNA聚合酶Ⅲ启动子H1的真核表达载体pTER117,经限制性内切酶酶切和DNA测序进行鉴定;在脂质体的介导下转染K562细胞,用RT-PCR分析bcr/abl mRNA的表达,细胞化学染色检测P210蛋白的表达.结果:构建bcr/abl融合基因siRNA真核表达载体pTER117经限制性内切酶酶切和DNA测序证实与设计完全一致,转染K562细胞24 h后,pTER117使bcr/abl mRNA的相对水平下降50%,使P210蛋白下降47%.结论:bcr/abl融合基因siR-NA真核细胞表达载体构建成功,并有效干扰K562细胞bcr/abl的表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	周永安		16	12	2.0	2.0
2	张景萍		24	62	5.0	6.0
3	郭向荣		3	5	2.0	2.0