抗氯霉素抗体可变区基因的克隆与序列分析

• 作者: 刘家劲 李秋 李黄金 林冬霞 田素娟 赵林 郭志云 陈伟 黄树林
• 来源期刊: 现代预防医学
• 学科: 医学
• 关键词: 抗氯霉素单克隆抗体 轻链可变区基因 重链可变区基因 克隆 序列分析
• 年，卷（期）: 2009,（24）
• 所属期刊栏目: 实验技术及其应用
• 页码范围: 4655-4658
• 分类号: R34
• 语种: 中文

摘要

[目的]克隆并分析抗氯霉素单克隆抗体(抗CAPmAb)的轻、重链可变区基因VL和VH. [方法]从分泌抗CAP mAb的杂交瘤细胞株4D10中提取总RNA,利用RT-PCR技术和一系列简并引物扩增VL和VH基因,扩增产物克隆于pMD18-T后测序,利用VBASE2数据库进行比对分析. [结果]有多对引物扩增到VL或VH基因,但同一基因的不同引物扩增到的序列相同.VL和VH基因长度分别为342 bp和357 bp,分别编码114个和119个氨基酸残基.编码产物均具有4个FR区、3个CDR区和2个特征性半胱氨酸残基,符合典型的KABAT结构特点,分别属于IGKV1亚群和IGH-V3609VH8家族.所克隆序列已被GenBank收录,序列号分别为FJ477893和FJ477894. [结论]成功克隆到抗CAPmAb的VL和VH基因,为进一步构建氯霉素残留检测用基因工程抗体打下了基础.