Smad4基因siRNA表达载体的构建与鉴定

• 作者: 何云武 崔慧辉 张彩平 王思远 雷小勇 龙石银
• 来源期刊: 现代生物医学进展
• 学科: 生物学
• 关键词: RNA干扰 Smad4 基因克隆 成纤维细胞 转化生长因子β
• 年，卷（期）: 2009,（6）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 1082-1084,1094
• 页数: 4页
• 分类号: Q782
• 字数: 3421字
• 语种: 中文

摘要

目的:以Smad4基因为靶标构建小干扰RNA(siRNA)真核表达载体.方法:根据GenBank公布的人Smad4核酸序列及SiRNA设计原则,用AmbionRNAi在线软件,筛选得到2个19 bp片段为靶序列,合成两端带有Bam H Ⅰ、HindⅢ酶切位点的发夹结构寡核苷酸序列,经过退火,将此序列克隆到真核表达质粒pSilencerTM3.1-H1 neo vector中,构建成重组质粒,酶切及测序验证.脂质体介导转染人原代增生性瘢痕成纤维细胞,经G418筛选细胞克隆,并用RT-PCR检测Smad4基因的表达.结果:成功构建了pSilencerTM3.1.H1 neo-Smad4 shRNA表达载体克隆,插入片段测序结果与合成的siRNA序列一致.RT-PCR结果显示转染shRNA1、shRNA2重组质粒的成纤维细胞内Smad4 mRNA水平均降低,其中以pSilencerTM3.1-H1-Smad4 shRNA1更为明显(P＜0.01).结论:构建P-Smad4 shRNA袁达载体成功,为进一步研究Smad4基因的RNA干扰奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张彩平	南华大学生物技术系	82	395	11.0	16.0
2	雷小勇	南华大学生命科学与技术学院药物药理研究所	102	531	13.0	16.0
3	龙石银	南华大学生物技术系	63	237	8.0	12.0
4	何云武	南华大学生命科学与技术学院药物药理研究所	26	78	5.0	8.0
8	崔慧辉	南华大学生物技术系	4	33	2.0	4.0
9	王思远	南华大学生物技术系	2	0	0.0	0.0