人BRCA1真核表达载体的构建及鉴定

• 作者: 李文才 董蕾
• 来源期刊: 山东医药
• 学科: 医学
• 关键词: 乳腺癌 BRCA1基因 真核表达 载体
• 年，卷（期）: 2009,（51）
• 所属期刊栏目: 研究生专栏
• 页码范围: 25-27
• 页数: 3页
• 分类号: R737.9
• 字数: 2029字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-266X.2009.51.010

摘要

目的 构建人BRCA1基因真核表达载体,为BRCA1基因高表达乳腺癌细胞株的研究奠定基础.方法 从胎盘中提取总RNA,设计引物,RT-PCR方法克隆BRCA1基因,以羧基端插入 pcDNA3.1(+)真核表达载体中.通过DNA序列测定,菌液提取质粒,酶切鉴定插入基因片段的正确性.提取无内毒素质粒pcDNA3.1-BRCA1并转染乳腺癌MDA-MB-231细胞,获得稳定高表达BRCA1细胞株.提取细胞总蛋白,Western blot方法鉴定BRCA1的表达.结果 从人胎盘组织中成功克隆出BRCA1基因N端933个碱基.测序及提取质粒酶切鉴定证实pcDNA3.1-BRCA1中含有插入方向、片段大小和DNA序列均正确BRCA1基因N端933个碱基序列.转染后细胞株中BRCA1表达水平明显高于转染前,P＜0.01.结论 成功构建了人BRCA1基因的真核表达载体.获得稳定高表达BRCA1的MDA-MB-231细胞株.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李文才		62	139	6.0	6.0
2	董蕾		6	11	2.0	3.0