苹果茎沟病毒外壳蛋白基因的克隆、原核表达及抗血清制备

• 作者: 周涛 周颖 张瑞 怀晓 范在丰
• 来源期刊: 植物保护学报
• 学科: 农学
• 关键词: 潜隐病毒 融合蛋白 Western blot 病毒检测
• 年，卷（期）: 2010,（5）
• 页码范围: 436-440
• 分类号: S4
• 语种: 中文

摘要

利用原核系统表达病毒编码的结构蛋白为抗原制备多克隆抗体是提高检测灵敏度和降低检测成本的重要途径.根据已报道的苹果茎沟病毒Apples stem grooving virus(ASGV)外壳蛋白(coat protein,CP)基因的核苷酸序列设计合成引物,利用RT-PCR方法克隆了ASGV的cp基因(命名为ASGV cp BJ),该基因由714个核苷酸组成,与GenBank中已报道的ASGV的cp基因核苷酸相似性为86%～96%.将ASGV的cp基因克隆到原核表达载体pET-28a上,转化大肠杆菌BL21(DE3),筛选得到阳性克隆pET-ASGV cp.SDS-PAGE电泳分析发现,经IPTG诱导,ASGV cp在大肠杆菌中得到高效表达,获得的融合蛋白的分子量约为33 kD.利用Ni珠吸附法纯化原核表达的目的蛋白,并以此蛋白为抗原制备了抗血清,ACP-ELISA检测结果显示,此抗血清效价为1:4096.western blot分析结果显示,该抗血清具有高度特异性,能够用于ASGV的快速检测.