远红荧光蛋白HcRed基因的原核和真核表达及鉴定

• 作者: 何志强 周成林 杨恒 焦志军 王楷文 王胜军 石燕 薛渊 许化溪 赵银霞 邵启祥
• 来源期刊: 江苏大学学报（医学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 远红荧光蛋白HcRed 树突状细胞系2.4 原核表达
• 年，卷（期）: 2010,（1）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 17-20
• 页数: 4页
• 分类号: Q78
• 字数: 3209字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-7783.2010.01.004

摘要

目的: 分别构建携带HcRed基因的PET28a(+)原核和PIRES真核载体,并分别在大肠埃希菌和鼠树突状细胞系(DC2.4)中表达、鉴定,为后续基因及蛋白的转染提供基础.方法: 参照基因库中HcRed1基因序列,设计HcRed CDS全长引物,以含有HcRed的质粒为模板,通过PCR获得目的基因,并分别连接于PET28a(+)原核载体和PIRES真核载体.经PCR、酶切鉴定后,原核载体转化大肠埃希菌,经IPTG诱导表达;真核载体用脂质体转染DC2.4,G418筛选出克隆后,应用RT-PCR和流式细胞仪进行检测.结果: 扩增出687 bp的HcRed CDS区序列,构建了原核和真核表达载体PET28a(+)/HcRed和PIRES/HcRed,分别于大肠埃希菌和DC2.4细胞系中成功表达.结论: 成功构建HcRed基因的原核、真核表达载体,并分别在工程菌和细胞系中成功表达,为后续基因及融合蛋白的筛选、示踪和体内观测奠定了基础.