鸡白介素18成熟蛋白突变体在毕赤酵母中的高效表达及其生物活性检测

• 作者: 岳寿松 王婷婷 王希辉 胡敬东 范忠玲 赵宏坤 陈金龙 黄亦钧
• 来源期刊: 微生物学报
• 学科: 医学
• 关键词: 鸡白介素18 毕赤酵母 突变体 生物活性
• 年，卷（期）: 2010,（9）
• 页码范围: 1258-1263
• 分类号: R392
• 语种: 中文

摘要

[目的]通过目的基因克隆,表达获得高产量具有生物活性的鸡白介素18成熟蛋白(mature chicken interleukin-18,mChIL-18).[方法]根据毕赤酵母密码子偏嗜性,通过引物设计来定点突变鸡白介素18基因,构建了重组质粒pPIC9K-mChIL-18.将线性化的重组阳性质粒电转到毕赤酵母GS115中,经筛选多拷贝阳性子后进行诱导表达.用MTT法和微量细胞病变抑制法检测其生物活性.[结果]筛选的多拷贝重组菌在诱导温度为28℃,培养液pH值为6.5,甲醇的诱导浓度为2%,诱导时间为120 h时表达量最高,约为480 mg/L.表达的mChIL-18蛋白能够刺激SPF鸡淋巴细胞大量增殖,用400μg/L的mChIL-18诱导淋巴细胞产生γ-干扰素(IFN-γ),其生物活性最高可达1.7×104U/mL,且能有效抑制水泡性口炎病毒(VSV)在鸡胚成纤维细胞(CEF)上的生长.[结论]毕赤酵母能够高效表达具有生物活性的鸡白介素18,有望作为免疫佐剂运用到工业化生产和兽医临床中.