基于植物p53保守序列构建RNAi的DNA片段方法

• 作者: 张黎明 李兴林 肖天剑 高洁
• 来源期刊: 天津科技大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 拟南芥 p53基因 保守序列 RNAi片段
• 年，卷（期）: 2010,（3）
• 页码范围: 19-22,26
• 分类号: Q813.1
• 字数: 3011字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-6510.2010.03.005

摘要

构建p53基因RNA干涉DNA片段的目的,是将其应用于植物悬浮培养中的细胞周期调节.依据拟南芥p53基因与其他高等植物具有高度保守区域的特点,合成其两个区域的核苷酸片段(Ⅰ和Ⅱ)及其相应的反向片段(Ⅰ'和Ⅱ'),并在Ⅱ和Ⅱ'端部分别引入内含子两个端部核苷酸序列.在相互连接后进行PCR选择扩增,其产物再与克隆载体连接并经过蓝白斑筛选获得重组DNA;在电泳和核苷酸测序鉴定后表明,最终得到了Ⅰ-5'-内含子-Ⅱ'-Ⅱ-内含子-3'-Ⅰ'序列的重组DNA片段.该片段两端含多克隆位点,通过插入植物的表达载体进入细胞基因组,在细胞中其转录产物将形成发夹结构,经胞内酶切后可以形成短的双链RNA片段,将具有干涉p53基因表达的功能.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张黎明	工业微生物教育部重点实验室天津科技大学生物工程学院	8	78	5.0	8.0
2	高洁	工业微生物教育部重点实验室天津科技大学生物工程学院	2	5	1.0	2.0
3	李兴林	工业微生物教育部重点实验室天津科技大学生物工程学院	3	9	2.0	3.0
4	肖天剑	工业微生物教育部重点实验室天津科技大学生物工程学院	2	5	1.0	2.0