荧光定量PCR快速检测金黄色葡萄球菌方法的建立

• 作者: 康琳 王景林 苏裕心 赵耀 郑学礼 高姗
• 来源期刊: 军事医学科学院院刊
• 学科: 医学
• 关键词: 金黄色葡萄球菌 实时定量PCR 病原体检测 饮用水 牛奶
• 年，卷（期）: 2010,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 25-29,39
• 页数: 6页
• 分类号: R378.11
• 字数: 5023字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-9960.2010.01.007

摘要

目的 利用SmartCycler系统建立一种简便、快速的荧光定量PCR检测金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,简称SAU)的方法.方法 根据SAU特异nuc基因设计引物和探针,建立检测体系,并在体系中加入内质控IAC,通过另一个标记不同荧光基团的TaqMan探针来监测IAC.用SAU 6538株污染饮用水和牛奶模拟实际样本,以评价体系的性能.结果 以含nuc片段的线性质粒为模板,反应体系的灵敏度为5 拷贝/μl;以6538株基因组DNA为模板,最低检测限为10 fg/μl;用涂平板法计数并10倍梯度稀释的菌液提取DNA为模板,最低检测限为50 cfu/ml.建立的定量标准曲线的循环域值(Ct)与模板拷贝数呈良好的线性关系(r~2≥0.998),PCR效率E≥96.7%.用SAU 6538污染饮用水和牛奶模拟实际样本,灵敏度可达5×10~2 cfu/25 ml样本.结论 所建立的nuc-IAC荧光定量PCR具有内质控IAC,既能定量检测食物是否被污染,又能监测PCR体系,防止假阴性发生或低估病原菌污染量.