猪瘟病毒E2蛋白部分抗原区基因在原核系统的分泌表达与鉴定

• 作者: 周顺 李俊 温建新
• 来源期刊: 中国动物检疫
• 学科: 农学
• 关键词: 猪瘟病毒 B/C抗原区 表达
• 年，卷（期）: 2010,（8）
• 页码范围: 24-26,44
• 分类号: S852.651
• 字数: 3656字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-944X.2010.08.016

摘要

基于猪瘟病毒主要保护性抗原E2囊膜糖蛋白有两个相对独立的抗原结构单位B/C抗原区和A/D抗原区,根据GeneBank中猪瘟病毒B/C基因核苷酸序列设计合成一对引物,经RT-PCR扩增猪瘟病毒B/C基因.将扩增所得猪瘟病毒B/C基因克隆于PMD18-T载体,然后定向亚克隆猪瘟病毒B/C基因至原核表达载体PET30(a)的多克隆位点中,经酶切鉴定后,将含有B/C基因的重组质粒命名为PET B/C.用PET B/C转化受体菌BL21,挑取单个茵落,用诱导剂IFFG以不同浓度进行诱导,并在不同诱导时间收集样品.经SDS-PAGE电泳分析证实B/C基因获得了表达,并在终浓度为1mM的IPTG,诱导6 h其表达达到高峰,经Western-blot分析证实表达的重组B/C蛋白具有反应活性,大小约为9 KD.用表达产物作ELISA,结果表明表达产物与猪瘟病毒抗血清可发生明显的反应,而与其它8种疫病阳性血清不发生反应.正常菌体蛋白与猪瘟病毒阳性血清也不发生反应.通过对58份送检血清样品的检测结果显示其与Dot-ELISA的相符率高达95%以上.试验证明利用原核表达系统制备的重组蛋白作为诊断用抗原,为研究亚单位疫苗或诊断抗原打下坚实基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李俊	山东省农业科学院畜牧兽医研究所	24	82	7.0	7.0
2	温建新		88	360	10.0	14.0
3	周顺		23	87	5.0	8.0