猪瘟兔化弱毒疫苗RT-LAMP检测方法的建立

• 作者: 仇华吉 孙元 常天明 张兴娟 李宏宇 石火英 韩秋影
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 学科: 农学
• 关键词: 猪瘟兔化弱毒疫苗 猪瘟病毒 反转录-环介导等温扩增 检测
• 年，卷（期）: 2010,（7）
• 页码范围: 701-707
• 页数: 7页
• 分类号: S852.659.6
• 语种: 中文

摘要

根据GenBank中登录的猪瘟病毒(CSFV)野毒株、猪瘟兔化弱毒疫苗(HCLV)和牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的NS5B基因序列,利用在线软件Primer Explorer V4 Software,设计了一套环介导逆转录等温核酸扩增(RT-LAMP)引物,建立了特异性检测HCLV的RT-LAMP方法.在Bst DNA聚合酶作用下,65℃恒温反应1 h即可完成扩增过程,扩增产物可通过20 g/L琼脂糖凝胶电泳或加入SYBR Green Ⅰ染料进行分析.经检测,该方法对于CSFV、BVDV以及其他猪源病毒无特异性扩增,具有良好的HCLV特异性;其灵敏度与本实验室建立的TaqMan实时荧光定量RT-PCR检测结果一致,均达到5个拷贝.分别用这两种方法对58份市售猪瘟弱毒疫苗进行检测,结果符合率达100%.表明,建立的HCLV RT-LAMP技术可以应用于基层实验室或养殖场,便于养殖户对疫苗中的弱毒含量进行监测.