CUL5基因的RNA干扰真核表达载体的构建

• 作者: 唐步坚 张玮 曲颂 朱小东 李力 李烨 李龄 苏芳 黎丹戎
• 来源期刊: 现代肿瘤医学
• 学科: 医学
• 关键词: CUL5基因 RNA干扰 真核表达载体
• 年，卷（期）: 2010,（2）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 255-259
• 页数: 5页
• 分类号: R730
• 字数: 4195字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-4992.2010.02.014

摘要

目的:构建CUL5基因的RNA干扰真核表达载体,探索CUL5在鼻咽癌放射治疗中加速再增殖的作用.方法: 根据 GenBank数据库提供的 CUL5基因mRNA序列,按照Tuschl 设计原则,设计选择双链小干扰RNA( small interfering RNA,siRNA ) ,再设计合成为能表达其小发卡结构RNA(small hairpin RNAs,shRNA)的DNA序列,并与pGPU6/GFP/Neo质粒定向连接,构建真核表达载体,并进行限制性内切酶酶切和DNA测序鉴定.结果: 经限制性内切酶酶切和DNA测序证实质粒中插入的为所需序列,通过RT-PCR证实其能够干扰CNE2细胞的CUL5基因表达.结论: CUL5基因RNA干扰真核细胞表达载体的构建成功.