检测猪繁殖与呼吸综合征病毒SYBR Green I实时荧光定量PCR方法的建立及初步应用

• 作者: 杨春华 祝建新 胡慧 钟毅 韩志涛
• 来源期刊: 浙江农业学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪繁殖与呼吸综合征病毒 GP5基因 实时荧光定量PCR SYBR Green I
• 年，卷（期）: 2010,（6）
• 页码范围: 745-749
• 分类号: S852.65
• 字数: 4021字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-1524.2010.06.008

摘要

利用反转录PCR(RT-PCR)技术扩增出猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)GP5基因部分片段,并克隆到pGEM-T Easy载体上,得到重组质粒作为荧光定量PCR检测的标准模板,以10倍梯度稀释模板,进行SYBR Green I荧光定量PCR扩增并制作标准曲线,建立PRRSV的荧光定量PCR检测方法.该方法检测灵敏度可达10拷贝/μL,与猪圆环病毒、猪乙型脑炎病毒、猪伪狂犬病毒、猪瘟病毒、猪流感病毒和猪细小病毒不发生交叉反应,具有良好的特异性和重复性;对16份临床疑似病料进行了检测,发现15份均为荧光定量PCR阳性,而常规RT-PCR只能检测出12份阳性.结果表明,建立的实时荧光定量PCR具有特异、敏感、快速、定量、重复性好等优点,可用于临床PRRSV感染的早期诊断以及分子流行病学调查.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	胡慧	河南农业大学牧医工程学院	43	178	7.0	11.0
2	杨春华	江西出入境检验检疫局检验检疫综合技术中心	11	80	5.0	8.0
3	韩志涛	河南农业大学牧医工程学院	3	8	2.0	2.0
4	钟毅	江西出入境检验检疫局检验检疫综合技术中心	7	59	4.0	7.0
5	祝建新	江西出入境检验检疫局检验检疫综合技术中心	21	54	4.0	6.0