禽流感病毒H5N1抗原基因克隆及体外转录

• 作者: 吕恒 张锦海 王平 王忠灿 王长军 郑纪山 鲁娟东
• 来源期刊: 中国公共卫生
• 学科: 生物学
• 关键词: 禽流感病毒 H5N1亚型 克隆 体外转录
• 年，卷（期）: 2010,（4）
• 所属期刊栏目: 专题报道之六--流感预防控制研究
• 页码范围: 385-387
• 分类号: Q785
• 语种: 中文

摘要

目的 通过基因克隆和体外转录,获得H5N1禽流感病毒抗原基因的RNA全长片段,为病原学检测提供阳性定量标准品.方法 设计H5N1禽流感病毒血凝素(HA)、神经氨酸酶(NA)及基质蛋白M(M)的基因克隆引物,RT-PCR从病毒RNA获得相应片段,分别连接至pGEM-T Easy质粒并筛选阳性重组质粒,测序鉴定后酶切线性化,用T7 RNA聚合酶进行体外转录,产物用DNase酶处理、纯化后测定浓度,RT-PCR验证.结果 获得含H5N1禽流感病毒HA、NA、M全长基因序列的RNA片段,并可准确定量其拷贝数,质量浓度HA为503.9 ng/μL、NA为379.2 ng/μL、M为437.8 ng/μL.结论 获得的RNA片段可作为H5N1禽流感病毒核酸快速检测方法的阳性定量标准品.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张锦海		42	165	8.0	9.0
2	王长军		134	625	12.0	17.0
3	王忠灿		46	247	8.0	13.0
4	王平		21	58	5.0	6.0
5	郑纪山		25	64	4.0	5.0
6	鲁娟东		4	21	3.0	4.0
7	吕恒		19	63	5.0	7.0