人血红素加氧酶-1的原核表达、纯化及其中和抗体的制备

• 作者: 刘庆军 周虹 杨军 王波 魏旭冉
• 来源期刊: 医学分子生物学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 血红素加氧酶 原核表达 可溶性表达 纯化 中和抗体
• 年，卷（期）: 2010,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 93-98
• 页数: 6页
• 分类号: Q55
• 字数: 4948字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3870/j.issn.1672-8009.2010.02.001

摘要

目的 确定人血红素加氧酶-1(human heme oxygenase-1,hHO-1)在大肠埃希菌中的表达条件与纯化方法,利用纯化的蛋白制备具有中和活性的hHO-1多克隆抗体.方法 将hHO-1原核表达质粒pMW172/hHO-1转入大肠埃希菌菌株BL21,通过改变摇床转速、诱导剂IPTG浓度和培养时间确定hHO-1蛋白的最佳可溶性表达条件;利用超声破碎、高速离心、分级盐析、分子筛层析等方法纯化hHO-1蛋白,建立体外HO-1活性测定方法检测hHO-1蛋白的活性;利用纯化的hHO-1活性蛋白作为抗原免疫新西兰兔,制备多克隆抗体;利用ELISA方法和Western印迹技术分别测定抗体的效价和特异性,通过HO-1活性测定检测抗体的中和活性.结果 确定hHO-1最佳可溶性表达条件为:37 ℃、200 r/min培养3 h后,0.1 mmol/L IPTG诱导培养4 h.超声破碎菌体,上清经30%～40%盐析纯化及分子筛层析纯化,获得活性hHO-1蛋白,收得率为30.3%,纯化倍数为2.83倍,纯度为90 %.制备的抗hHO-1的兔血清效价达到10~6,并能中和掉46 % hHO-1的催化活性.结论 为hHO-1蛋白的表达和纯化以及多克隆抗体制备确立了可行的技术方案;获得了高纯度活性hHO-1蛋白及hHO-1多克隆抗体,为HO-1功能、结构研究,以及相关疾病研究奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	周虹	军事医学科学院野战输血研究所	69	379	10.0	14.0
2	杨军	军事医学科学院野战输血研究所	15	143	6.0	11.0
3	刘庆军	军事医学科学院野战输血研究所	6	10	2.0	2.0
4	王波	军事医学科学院野战输血研究所	26	116	6.0	9.0
5	魏旭冉	军事医学科学院野战输血研究所	3	4	1.0	1.0