LAMP快速检测对虾IHHNV的方法与应用

• 作者: 何琳 徐海圣 戎华南 王美珍
• 来源期刊: 病毒学报
• 学科: 农学
• 关键词: 传染性皮下及造血组织坏死病毒 对虾 环介导等温扩增 快速检测
• 年，卷（期）: 2010,（6）
• 页码范围: 490-495
• 页数: 6页
• 分类号: S852.65+9.5
• 语种: 中文

摘要

建立了一种检测对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒(Infectious hypodermal and hematopoietic necrosis virus,IHHNV)快速、灵敏的环介导等温扩增(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)方法.针对IHHNV非结构蛋白基因NS1序列的6个保守区域,利用Primer Explorer v4.0软件设计4条引物,建立了IHHNV环介导等温扩增快速检测方法,对反应温度和反应时间等参数进行了优化,并将建立的LAMP检测方法与常规PCR检测进行了比较分析.结果表明,LAMP最适反应在65℃恒温条件60 min内完成,凝胶电泳呈现特征性梯型条带;反应体系中添加SYBR Green I荧光染料后,绿色的阳性结果很明显区别于橙色阴性结果.LAMP方法的最低检出限为100拷贝/μL,灵敏度较常规PCR高1 000倍.用建立的LAMP方法对临床发病南美白对虾样品进行了检测,结果表明建立的LAMP方法适合于对虾IHHNV的现场快速检测.