人MCLl基因表达载体的构建及在293细胞中的表达

• 作者: 杨卫平 胡博华 许阳 郭维维 马龙
• 来源期刊: 中华耳科学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: MCL1基因(髓样细胞白血病-1基因) 质粒 基因治疗
• 年，卷（期）: 2010,（4）
• 页码范围: 466-469
• 分类号: R349.86
• 字数: 2140字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-2922.2010.04.023

摘要

目的 构建含有人髓细胞白血病基因-1(myeloid cell leukemia-1,MCLl)和绿色荧光蛋白基因(pEGFP)的真核共表达载体,为聋病的基因治疗奠定实验基础.方法 应用基因重组技术和限制性内切酶酶切,及基因测序方法,构建并鉴定pEGFP-MCL1真核表达质粒.经脂质体介导转染293细胞系,荧光显微镜下观察pEGFP-MCL1真核表达质粒在293细胞系中的表达,利用逆转录-聚合酶链反应(Reverse transcription polymerasechain reaction,RT-PCR)检测MCL1 mRNA的表达,Western Blot(蛋白质印迹)方法 检测MCL1蛋白的表达.结果 阳性重组子经酶切鉴定含有MCL1基因片段,基因测序结果 与GenBank中MCL1序列相同.重组pEGFP-MCL1真核表达质粒转入293细胞系后24小时,荧光显微镜下可见绿色荧光表达,RT-PCR能够扩增出MCL1的条带,Western Blot检测出40kDa大小的蛋白.结论 成功地构建了含有人全长MCL1基因和pEGFP基因的真核共表达载体,且能在哺乳动物293细胞系中表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	郭维维	解放军总医院耳鼻咽喉科研究所	27	103	6.0	8.0
2	杨卫平	解放军总医院耳鼻咽喉科研究所	16	81	6.0	8.0
3	马龙	解放军第二炮兵总医院口腔科	10	19	2.0	4.0
4	许阳	解放军总医院呼吸科	14	45	3.0	6.0