增强子驱动的Cre转基因小鼠的构建及Cre基因的表达鉴定

• 作者: 刘勇 张玉建 王浩 王淼 王立良 邵一鸣
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: 增强子 Cre重组酶 转基因小鼠 ROSA26报告小鼠 LacZ染色
• 年，卷（期）: 2010,（3）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 304-309
• 分类号: Q789
• 字数: 4733字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2010.03.002

摘要

目的:探索将增强子应用于构建Cre转基因小鼠品系,为以条件基因敲除为基础的基因功能研究提供更多的工具.方法:通过PCR方法从小鼠的细菌人工染色体扩增UH增强子片段,构建含有Hsp68基础启动子、增强子UH、Cre重组酶基因和SV40 polyA的转基因载体pLW400,将3.3 kb的转基因片段通过显微注射导入小鼠受精卵;为了检测Cre在转基因小鼠中的表达,将转基因一代小鼠与纯合子ROSA26报告小鼠(R/R)交配,收集第14 d胚胎期(E14)的舌组织进行LacZ染色检测鉴定.结果:经鉴定,31只子代小鼠中有6只携带外源基因,整合率为19.4%;与R/+对照相比,E14期的双基因型Cre,R/+舌组织为阳性结果(蓝色).这表明Cre基因在转基因小鼠舌组织内得到表达,并在体内介导ROSA26基因座loxP位点间的重组,且有效删除了2个loxP之间的片段,从而启动了LacZ基因的表达.结论:构建了UH增强子-Hsp68Cre的转基因小鼠,在舌肌中特异表达Cre基因,提示增强子可以被选择应用于Cre转基因小鼠的构建;为舌肌的发育和再生研究奠定了基础.