酿酒酵母乙醇脱氢酶2(ADH2)基因的克隆表达及活性验证

• 作者: 于孟斌 刘敏 姜永超 徐莉 智庆文 赵创新 陈高云
• 来源期刊: 生物工程学报
• 学科: 工学
• 关键词: 酿酒酵母 乙醇脱氢酶2 克隆 表达
• 年，卷（期）: 2010,（2）
• 所属期刊栏目: 工业生物技术
• 页码范围: 165-169
• 页数: 5页
• 分类号: TS2
• 语种: 中文

摘要

为了从酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae中克隆出乙醇脱氢酶2(Alcohol dehydrogenase 2,ADH2)基因并使之在大肠杆菌中高效表达.以酿酒酵母细胞中提取的总RNA为模板,通过反转录获得酿酒酵母乙醇脱氢酶2基因,连接到表达载体pTAT上,得到重组表达质粒pTAT-ADH2,将此重组质粒转化到大肠杆菌BL21中,重组工程菌株经IPTG诱导表述得到ADH2蛋白.将该蛋白纯化后,在体外进行活性检测和小鼠体内进行毒理试验,检测ADH2的酶活性.测序结果表明克隆的基因与GenBank中所报道的adh2基因序列有90%的同源性,经SDS-PAGE电泳分析,目的蛋白得到了有效表达,蛋白条带扫描分析表明,表达量占总蛋白的50%左右,纯化得到的蛋白在小鼠体内进行毒理试验,显示出一定的活性.酿酒酵母adh2基因的克隆正确,不仅在大肠杆菌中进行了高效表达而且表现出了较好的酶活性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘敏	防化指挥工程学院生物防护教研室	4	12	2.0	3.0
2	陈高云	防化指挥工程学院生物防护教研室	3	11	2.0	3.0
3	于孟斌	防化指挥工程学院生物防护教研室	4	11	2.0	3.0
4	智庆文	防化指挥工程学院生物防护教研室	2	10	2.0	2.0
5	徐莉	防化指挥工程学院生物防护教研室	3	23	3.0	3.0
6	赵创新	防化指挥工程学院生物防护教研室	1	6	1.0	1.0
7	姜永超	防化指挥工程学院生物防护教研室	1	6	1.0	1.0