布鲁菌抗原的快速克隆与高效表达

• 作者: 于爽 付思美 孙宏迪 徐杰 曲勍 杜昕颖 汪舟佳 王玉飞 白耀霞 钟志军 陈泽良 高岚 黄留玉
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: Gateway 布鲁菌 蛋白表达 可溶性分析
• 年，卷（期）: 2010,（3）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 323-327
• 分类号: Q78
• 字数: 3696字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2010.03.006

摘要

目的:通过Gateway技术构建布鲁菌抗原表达载体,并筛选出高效可溶性表达载体.方法:以山羊布鲁菌16M株染色体DNA为模板,扩增4个布鲁菌抗原基因BMEI2002、BMEI1069、BMEI1483和BMEI0748,利用Gateway BP反应将基因克隆到入门载体pDONR201中,构建重组质粒,然后用Gateway LR反应将基因重组到3种表达载体(pDEST17、pHXGWA、pHGGWA)中,构建相应的重组表达质粒,将重组质粒转化大肠杆菌ER2566(DE3)并诱导表达,分析利用3个不同载体所表达蛋白的表达量及表达形式.结果:利用BP反应构建了4个基因的重组质粒,用LR反应将这些基因分别克隆到表达载体,构建得到了相应的表达载体;诱导表达后的可溶性分析显示,含6×His和TRX标签的pHXGWA所表达的蛋白在表达量和可溶性方面均优于pDEST17和pHGGWA.结论:通过Gateway技术实现了布鲁菌抗原的快速克隆,筛选到的pHXGWA可作为后续大规模克隆表达载体,为布鲁菌抗原的大规模克隆表达和保护性抗原的筛选奠定了基础.