酮古龙酸菌细胞色素c基因的克隆及表达

• 作者: 何建勇 张惟材 汪建华 熊向华 贾宁 赵岩
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: 细胞色素c 酮古龙酸菌 表达 电子传递 血红素染色
• 年，卷（期）: 2010,（5）
• 页码范围: 619-622
• 分类号: Q78
• 字数: 3018字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2010.05.005

摘要

目的:从酮古龙酸菌5CB329中分离细胞色素c(Cytc)相关基因,在大肠杆菌中进行表达并验证.方法:根据酮古龙酸菌SCB329基因组序列设计引物,通过PCR从5CB329基因组中扩增cytc基因,酶切后连接pET22b表达载体,转化至大肠杆菌DH5α后提取质粒,经PCR、质粒双酶切及测序鉴定后,转入大肠杆菌B121(DE3),并对表达条件进行考察;用Chelating Sepharose珠粒对可溶性的Cytc-His融合蛋白进行纯化;经光谱扫描和血红素染色等方法对表达蛋白定性分析.结果:PCR扩增的cytc基因长513 bp;重组菌在IPTG浓度为0.025mmol/L的条件下,于28℃诱导10h后,SDS-PAGE分析可见表达条带,相对分子质量约为18×103;Ni柱亲和层析纯化得到目的蛋白,纯化蛋白经光谱扫描呈现Cytc特征峰,血红素染色呈现阳性结果.结论:从酮古龙酸菌SCB329中分离得到一种cytc基因,并表达纯化了融合蛋白Cytc-His,纯化蛋白呈现Cytc特性,为研究酮古龙酸菌中产酸关键酶的电子传递机制奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	何建勇		55	294	10.0	14.0
2	熊向华	军事医学科学院生物工程研究所	46	135	6.0	9.0
3	汪建华	军事医学科学院生物工程研究所	46	163	6.0	10.0
4	张惟材	军事医学科学院生物工程研究所	75	603	13.0	22.0
5	赵岩	军事医学科学院生物工程研究所	10	102	5.0	10.0
6	贾宁	军事医学科学院生物工程研究所	1	0	0.0	0.0