STAT3ER慢病毒表达载体的构建及体外对神经元再生作用的研究

• 作者: 于胜波 刘用楫 许晓光
• 来源期刊: 解剖科学进展
• 学科: 医学
• 关键词: STAT3 慢病毒 轴突生长
• 年，卷（期）: 2010,（1）
• 所属期刊栏目: 原著
• 页码范围: 27-32
• 页数: 6页
• 分类号: R338.1+1
• 字数: 3551字
• 语种: 中文

摘要

目的 构建携带信号转导和转录激活蛋白STAT3和基因突变的雌激素受体ER的慢病毒载体,并转染受损的大鼠背根神经节神经元,研究其对神经元突起再生的作用.方法 运用基因重组技术,将STAT3、ER和核糖体介导的绿色荧光蛋白(IRES-GFP)片段插入慢病毒载体pRRL-MCS+的PmeI位点构建慢病毒载体pRRL-STAT3ER-IRES-GFP,经RT-PCR、Western blotting和测序分析加以鉴定其正确性.将慢病毒载体3质粒细胞包装系统(主体质粒pRRL-STAT3ER-IRES-GFP、包装质粒pCMVdeltaR8.74和包膜质粒VSV-G)共转染293T细胞,包装慢病毒载体并测定滴度.切断大鼠左L5近神经节的神经根,摘取L5背根神经节做分离神经元培养,将pRRL-STAT3ER-IRES-GFP感染神经元细胞并观察神经元细胞核转运和突起的长度.结果 构建的慢病毒载体pRRL-STAT3ER-IRES-GFP经RT-PCR和Western blotting鉴定正确,测序分析与Genbank报道的STAT3基因序列完全一致.3质粒共转染293T咖胞后,测定慢病毒滴度为1010-11Tu/ml.转染pRRL-STAT3ER-IRES-GFP的神经元经4-羟基三苯氧胺(4HT)激活,STAT3ER有明显的核转运,并增强突起的生长,经X2检验与对照组有显著性差异.结论 成功构建了表达小鼠STAT3ER基因的慢病毒载体并证实STAT3信号转导有利于轴突生长.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘用楫	大连医科大学附属二院神经外科	48	387	10.0	18.0
2	于胜波	大连医科大学解剖教研室	52	168	6.0	10.0
3	许晓光	大连医科大学附属二院神经外科	24	141	6.0	10.0