广州管圆线虫Ⅴ期幼虫cDNA文库的构建及免疫学筛选

• 作者: 梁韶晖 潘长旺 王寒 谭峰 赵巧莲 马雪莲
• 来源期刊: 中国病原生物学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 广州管圆线虫 Ⅴ期幼虫 cDNA文库 免疫学筛选 分析
• 年，卷（期）: 2010,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 48-53
• 页数: 6页
• 分类号: R383.19
• 语种: 中文

摘要

目的 构建广州管圆线虫Ⅴ期幼虫cDNA文库,免疫学筛选抗原基因.方法 提取广州管圆线虫Ⅴ期幼虫总RNA,用Clonteeh公司的SMART~(TM)cDNA文库构建试剂盒构建未扩增文库,检测未扩增文库滴度和重组率后,进行文库扩增.用大鼠感染血清作免疫探针筛选文库,PCR扩增外源基因插入片段并测序,用生物信息学软件进行同源性比对,推导氨基酸序列,预测其理化性质.结果 成功构建了广州管圆线虫Ⅴ期幼虫cDNA文库,免疫学筛选获得11个阳性克隆,对测序的9个阳性克隆进行初步分析,1个与广州管圆线虫Ⅴ期幼虫的1个EST同源性为99%,6个(有2个为同一克隆)与秀丽隐杆线虫和新杆状线虫均有不同程度的同源性,最高达91%.共有7个阳性克隆存在完整的开放阅读框.结论 从广州管圆线虫Ⅴ期幼虫cDNA文库中初步筛选出7个有诊断意义的抗原基因,为其相关研究奠定了基础.