稳定长期沉默肾小管上皮细胞Megalin基因表达的载体构建

• 作者: 詹林达 黄锋先
• 来源期刊: 中国中西医结合肾病杂志
• 学科: 医学
• 关键词: RNAi Megalin 肾小管上皮细胞
• 年，卷（期）: 2010,（6）
• 所属期刊栏目: 实验论著
• 页码范围: 478-481,后插一
• 分类号: R3
• 字数: 4758字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-587X.2010.06.004

摘要

目的:为探讨沉默Megalin基因对肾小管上皮细胞Megalin蛋白诱导表达的抑制作用,构建长期下调Megalin蛋白表达的慢病毒载体作为研究工具.方法:分别用30,50,80,100 nmol/L siRNA或对照siRNA转染人HK-2细胞,48 h后用免疫荧光和RT-PCR鉴定Megalin基因表达筛选有效的序列,用有效或对照组序列的正义链和反义链,中间加loop环,两端加入XhoⅠ和hindⅢ的酶切位点作为目的序列,经过XhoⅠ和HindⅢ双酶切的慢病毒载体质粒PLL3.7作为载体,将目的序列与载体连接,转化到XL-10Gold高感受态大肠杆菌中,XhoⅠ和HindⅢ双酶切初步鉴定,测序进一步鉴定正确的序列.得到长期下调人Megalin基因表达的慢病毒载体,并包装慢病毒感染人HK-2细胞,免疫组化鉴定干扰有效,以此获取Megalin表达下调的HK-2细胞株.结果与结论:成功筛选出有效干扰人Megalin基因的siRNA,通过慢病毒感染成功获得长期稳定下调人Megalin表达的肾小管上皮细胞株.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	黄锋先	中山大学附属第一医院肾内科	22	62	4.0	6.0
2	詹林达	广东省中山市人民医院肾内科	10	49	4.0	6.0