水稻OsCKX2基因表达实时荧光定量PCR检测技术的建立

• 作者: 何霞红 刀丽云 孟国成 朱有勇 高东 魏富刚
• 来源期刊: 云南农业大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: 水稻 基因表达 实时定量RT-PCR TaqMan探针
• 年，卷（期）: 2010,（3）
• 所属期刊栏目: 植物保护
• 页码范围: 351-357
• 分类号: S511.032
• 字数: 4204字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-390X.2010.03.009

摘要

从水稻花序分生组织总RNA中逆转录扩增总cDNA,PCR扩增OsCKX2基因中设计的目的片段,将纯化的目的片段克隆到pMD19-T Simple载体中,PCR鉴定并测序分析,制备成荧光定量PCR梯度浓度质粒标准品.对重组质粒进行实时荧光定量PCR实验.标准曲线结果表明,建立的OsCKX2基因mRNA表达实时荧光定量PCR检测方法,特异性好,灵敏度高,可达102拷贝;线性范围广,可达1.0×102～1.0×107拷贝;扩增效率高(E=95.9%);稳定性、重复性好,可靠性高,批内和批间变异系数(CV)仅为:0.14%～0.29%和0.16%～0.35%;循环阈值与PCR 体系中起始模板量的对数值之间有着良好的线性关系(r＝1.000),可对OsCKX2基因表达进行准确实时定量.一个基于TaqMan 实时荧光定量RT-PCR技术,定量分析控制水稻谷粒数关键基因之一OsCKX2转录水平的技术体系被成功建立.该技术体系重组质粒标准品的制备方法具有很强的实用性;对基因OsCKX2的表达实时定量准确、可靠、便捷.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	朱有勇	云南农业大学农业生物多样性应用技术国家工程研究中心	99	1789	25.0	37.0
2	何霞红	云南农业大学农业生物多样性应用技术国家工程研究中心	51	310	11.0	15.0
3	魏富刚	云南农业大学农业生物多样性应用技术国家工程研究中心	2	4	1.0	2.0
4	高东	云南农业大学农业生物多样性应用技术国家工程研究中心	3	28	2.0	3.0