抗CD3/抗CD19微型双功能抗体的构建、表达及活性测定

• 作者: 任思楣 刘荣 师锐赞 李崴 杨铭 王敏 程昕 范冬梅
• 来源期刊: 中国癌症杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 基因工程抗体 双功能抗体 CD3 CD19 淋巴瘤 免疫治疗
• 年，卷（期）: 2010,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 241-246
• 分类号: R730.3
• 字数: 4271字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-3639.2010.04.001

摘要

背景与目的:微型双功能抗体是基因工程抗体的-种形式,它具有两个抗原结合位点,可选择性募集效应细胞到靶细胞周围,介导特异性杀伤作用.本实验构建抗CD3/抗CD19微型双功能抗体(diabody)载体,表达纯化后测定其生物学活性.方法:用重叠PCR(overlap PCR)和PCR方法,构建抗CD3/抗CD19 diabody 载体,转化感受态大肠埃希菌进行原核表达.表达产物经抗His-tag亲和层析柱分离纯化,12%SDS-PAGE电泳及Western blot鉴定.应用间接免疫荧光和竞争性免疫荧光结合流式细胞分析技术(PACS)检测生物学活性.结果:基因重组质粒经测序证实序列正确.抗CD3/抗CD19 diabody能够在原核表达系统中进行可溶性表达.12%SDS-PAGE显示28×103和26×103各有-条带,Western blot在28×103显示有条带,与预期相符.表达产物经纯化定量可达5 mg/L.FACS检测抗CD3/抗CD19 diabody可与CD19+ Raji细胞和CD3+ Jurkat细胞特异结合,并能竞争性抑制HIT3a和HIT19a与上述细胞的结合活性.结论:本实验成功构建了抗CD3/抗CD19 diabody,并且能够进行可溶性表达,可与CD19+ Raji细胞和CD3+ Jurkat细胞特异结合,为以后的抗体功能实验奠定了基础.