双Bt基因提高青花菜对菜粉蝶和小菜蛾抗性

• 作者: 付雪林 叶志彪 张余洋 张俊红 张晓辉 李汉霞 王涛涛
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 双价转基因 Cry1Ac Cry1C 抗虫性 青花菜
• 年，卷（期）: 2010,（4）
• 页码范围: 654-662
• 分类号: S6
• 字数: 6219字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2010.04.005

摘要

以青花菜(Brassica oleracea L.ssp.italica)下胚轴为外植体,通过农杆菌介导的遗传转化方法将苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis)晶体毒蛋白基因Cry1Ac和Cry1C分别导入青花菜栽培品种绿彗星中,各获得35株卡那霉素抗性植株.分别以Cry1Ac和Cry1C特异引物对转基因植株进行PCR扩增,结果得到27株Cry1Ac阳性植株和13株Cry1C阳性植株.以目的基因Cry1Ac和Cry1C为探针,进行Southern blot分析,证明多数植株目的基因已经整合到青花菜基因组中.对含有单拷贝目的基因植株自交纯合后通过有性杂交获得带有Cry1Ac和Cry1C双价的转基因青花菜.利用RT-PCR检测Bt基因在转基因植株中的表达情况,发现不同株系间在RNA水平上存在显著的表达差异,部分株系中双价Bt同时得到表达.ELISA检测转基因植株Bt毒蛋白含量为0.12～0.82 μg/gFW.结合室内和田间饲虫试验,证明抗虫效果与Bt毒蛋白表达水平正相关.通过多世代选择,获得高抗菜粉蝶(Pieris rapae L.)和小菜蛾(Plutella xylostella L.)的纯合转基因青花菜材料.双价抗虫基因共同作用,提高了青花菜的抗虫性.