自杀基因TK腺相关病毒载体的构建及其抑制肿瘤细胞的功能研究

• 作者: 于磊 孙岩 李娜 雷铭德 韩瑞发
• 来源期刊: 中国现代医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 腺相关病毒 单纯疱疹病毒胸苷激酶基因 膀胱肿瘤 更昔洛韦 吉地他滨
• 年，卷（期）: 2010,（21）
• 页码范围: 3240-3244
• 页数: 5页
• 分类号: R737.14
• 字数: 4651字
• 语种: 中文

摘要

目的 探讨腺相关病毒(rAAV)-单纯疱疹病毒胸苷激酶基因(herpes simplex virus thymidine kinase,HSV-TK)(简称rAAV-TK)载体的构建及其生物学效应的初步鉴定.方法 用PCR扩增TK序列至pAAV-MCS载体,构建pAAV-TK;采用AAV-Helper Free System包装系统、"氯仿-PEG/NaCl沉淀-氯仿抽提"及冰乙醇沉淀法进行AAV的包装、纯化和浓缩,对病毒颗粒进行鉴定;用MB49-PSA细胞对rAAV-TK生物学效应进行初步鉴定.结果 成功构建pAAV-TK载体,并经酶切、PCR及测序验证其准确性;rAAV病毒颗粒滴度达2×1010v.p/mL,浓缩后可达到2 × 1011～2×1012v.p/mL;rAAV-TK可以分泌TK基因,加入药物更昔洛韦(Ganciclovir,GCV)和吉地他滨(Gemcitabine,GVC),该基因能有效诱导膀胱肿瘤细胞MB49-PSA凋亡.结论 成功构建rAAV-TK腺相关病毒,体外实验表明rAAV-TK/GVC/GCV系统能高效诱导膀胱肿瘤细胞的凋亡.