沙眼衣原体pORF5蛋白真核表达系统的构建与鉴定

• 作者: 吴移谋 周洲 李忠玉 黄秋林
• 来源期刊: 南华大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 沙眼衣原体 pORF5基因 真核表达
• 年，卷（期）: 2010,（1）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 17-20
• 分类号: R374.1
• 字数: 2692字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-1116.2010.01.005

摘要

目的 构建沙眼衣原体(Ct)pORF5基因重组质粒pDSRed-C1/pORF5,建立pORF5稳定转染的表达系统并对其进行鉴定. 方法 PCR法扩增pORF5基因,定向插入pDSRed-C1真核表达载体构建pDSRed-C1/pORF5重组体,重组体经酶切、PCR及测序鉴定后,用脂质体介导的基因转染法,分别将pDSRed-C1/pORF5和pDSRed-C1导入HeLa-229细胞,通过G418筛选获得转入目的 基因的阳性细胞克隆;荧光显微镜和Western blot检测pORF5蛋白在细胞中的表达. 结果所克隆的pORF5基因片段经测序完全正确;转染pDSRed-C1/pORF5的HeLa-229细胞大部分有pORF5蛋白的表达,而转染空载体pDSRed-C1或未转染的HeLa-229细胞,均未见pORF5蛋白表达. 结论 成功构建了稳定表达外源新基因pORF5的细胞系,为进一步研究该蛋白的结构功能、阐明Ct的致病机制、研制基因工程疫苗提供了有利的条件.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吴移谋	南华大学微生物学与免疫学教研室	243	1097	14.0	22.0
2	李忠玉	南华大学微生物学与免疫学教研室	52	214	8.0	12.0
3	黄秋林	南华大学微生物学与免疫学教研室	59	266	10.0	12.0
4	周洲	南华大学微生物学与免疫学教研室	33	115	6.0	9.0