沙眼衣原体pORF5蛋白通过激活PI3K/Akt信号通路抑制细胞凋亡

• 作者: 卜继常 周洲 李忠玉 聂倩 邹燕 陆春雪 陈超群 雷文波
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 沙眼衣原体 pORF5蛋白 细胞凋亡 PI3K/Akt信号通路
• 年，卷（期）: 2018,（3）
• 所属期刊栏目: 基础免疫学
• 页码范围: 321-324,330
• 页数: 5页
• 分类号: R374+.1
• 字数: 3576字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-484X.2018.03.001

摘要

目的:探讨沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,Ct)pORF5蛋白对细胞凋亡的影响,并进一步分析其分子机制,为阐明Ct致病机制提供实验依据.方法:pGEX-6p/pORF5重组质粒转化XL1-blue大肠杆菌,IPTG诱导表达GST-pORF5融合蛋白,融合蛋白经谷胱甘肽琼脂糖凝胶4B纯化及蛋白酶切除GST标签后得到pORF5蛋白.用不同浓度的pORF5蛋白刺激HeLa细胞,Western blot 检测不同时间Bax和Bcl-2的表达水平以及PI3K/Akt磷酸化水平,Hoechst 33342及流式细胞技术分析细胞凋亡情况;HeLa细胞经PI3K/Akt特异性抑制剂LY294002预处理1 h后,再用pORF5蛋白刺激24 h,测定细胞凋亡率,并进一步分析凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的表达水平及PI3K/Akt磷酸化水平.结果:凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的表达变化与pORF5蛋白浓度呈现一定的浓度和时间依赖性,当pORF5蛋白浓度达10 μg/ml时,Bax表达下调,Bcl-2的表达上调,当升高至15 μg/ml时,Bax和Bcl-2的表达量变化最明显;15 μg/ml的pORF5蛋白刺激HeLa细胞24 h,Bax和Bcl-2表达变化最明显;流式细胞检测结果显示:pORF5蛋白刺激组较TNF-α处理组和未处理组细胞凋亡率分别降低了27.3%(P<0.01)和8.4%(P<0.05);Akt在pORF5蛋白刺激15 min后发生磷酸化,30 min后磷酸化水平达到峰值,用PI3K抑制剂LY294002预处理Hela细胞后,发现Akt的磷酸化显著减少,Bax蛋白表达明显上调,Bcl-2表达明显下调;LY294002处理组细胞凋亡率相比于对照组增加了13.0% (P<0.01).结论:pORF5蛋白通过激活PI3K/Akt信号通路调节Bcl-2和Bax蛋白的表达抑制细胞凋亡.